Multiplex One Step RT-qPCR Premix-UNG
Cat nro: HCB5145A
Multiplex One Step RT-qPCR Probe Kit (UDG Plus) on multipleksi kvantitatiivinen PCR-sarja, joka perustuu RNA:han templaattina.Kokeen aikana käänteistranskriptio ja kvantitatiivinen PCR suoritettiin samassa putkessa, mikä yksinkertaisti kokeellista toimintaa ja vähensi kontaminaatioriskiä.Tässä pakkauksessa ensimmäinen juoste cDNA syntetisoitiin tehokkaasti lämmönkestävällä käänteistranskriptaasilla ja monistettiin kvantitatiivisesti HotStart Tag DNA -polymeraasilla.Pakkaus sisältää pääasiassa optimoidun MP-puskurin, entsyymisekoituksen jne. Puskuriliuos sisältää jo Mg:a2+ja dNTP.Lisäksi lisätään tekijöitä, jotka voivat tehokkaasti estää epäspesifistä PCR-amplifikaatiota ja parantaa useiden qPCR-reaktioiden amplifikaatiotehokkuutta, mikä voi varmistaa monistustehokkuuden ja suorittaa jopa useita monistusreaktioita.dUTP/UDG-järjestelmä lisättiin estämään tehokkaasti aerosolikontaminaation riskiä.
Komponentit
1. Puskuri
2. Entsyymisekoitus
Erittely
| Hot Start | Sisäänrakennettu kuumakäynnistys |
| Havaitsemismenetelmä | Primer-sondin tunnistus |
| PCR-menetelmä | Yksivaiheinen RT-qPCR |
| Polymeraasi | Taq DNA-polymeraasi |
| Näytteen tyyppi | DNA |
Varastointiolosuhteet
Tuote toimitetaan kuivajään kanssa ja sitä voidaan säilyttää -25 ~ -15 ℃ 1 vuoden ajan.Sitä tulisi välttää useinjäädyttää-sulattaa.On suositeltavaa tallentaa erikseen.
Ohjeet
1.Reaktio Järjestelmä
| Komponentit | Tilavuus (μL) | Lopullinen keskittyminen |
| 2 × MP puskuri | 12.5 | 1× |
| Entsyymisekoitus | 1 | - |
| Pohjuste/koetin-seos (2,5 μM) | 3 | 0,3 μM |
| Templaatti-RNA | 1-10 | - |
| RNaasi-vapaa H2O | 25 asti | - |
Huomautuksia:
Sekoita hyvin ennen käyttöä, vältä voimakkaan tärinän aiheuttamia liiallisia kuplia.
a.Pohjustekonsentraatio: Primer-seos, joka sisältää multipleksialukkeen, tilanteesta riippuen optimaalinen alukepitoisuus voi olla välillä 0,l - 1,0 μM.
b.Koetinpitoisuus: Koetinseos, joka sisältää multipleksisen koettimen leimauseron fluoresoivan ryhmän, tilanteesta riippuen optimaalinen koetinpitoisuus voi olla välillä 0,05 - 0,5 μM.
c.Templaatin laimennus: qPCR on erittäin herkkä ja on suositeltavaa laimentaa malli.Säätö-Ct-arvo on sopiva välillä 20-35.
d.Järjestelmän valmistelu: Valmistele ultrapuhdas työpöytä sekä pipetti ja reaktioputki ilman nukleaasijäämiä;on suositeltavaa käyttää pistoolin päätä suodatinelementillä.Vältä ristikontaminaatiota ja aerosolikontaminaatiota.
2. Optimoitu pyöräilypöytäkirja
| Kierrä askel | Temp. | Aika | Pyörät |
| Käänteinen transkriptio | 50℃a | 20 minuuttia | 1 |
| Alkudenaturointi | 95℃ | 5 minuuttia | 1 |
| Monistusreaktio | 95℃ | 15 sek |
40-45 |
| 60℃ b | 30 sekuntia c |
Huomautuksia:
a.Käänteinen transkriptio: Lämpötila voi valita 42 °C tai 50 °C.
b.Monistusreaktio: Lämpötila säädetään suunniteltujen alukkeiden Tm-arvon mukaan.
c.Fluoresenssisignaalin hankinta: Aseta kokeellinen menettely instrumentin käsikirjan vaatimusten mukaisesti.
Huomautuksia
Käytä tarvittavia henkilönsuojaimia, kuten laboratoriotakkia ja käsineitä terveytesi ja turvallisuutesi varmistamiseksi.
