Multiplex qPCR Probe Premix
Cat nro: HCB5051A
TaqMan multiplex qPCR Master Mix (Dye Based) on esiratkaisu 2 × reaaliaikaiseen kvantitatiiviseen PCR-monistukseen, jolle on tunnusomaista korkea herkkyys ja spesifisyys, joka on väriltään sininen ja jolla on näytteen lisäysvaikutus.Tämä tuote on 2× Mix -esisekoitettu reagenssi, joka mahdollistaa jopa neljä fluoresoivaa kvantitatiivista PCR-reaktiota yhdessä reaktiokaivossa.Tämä tuote sisältää geneettisesti muunnetun vasta-ainemenetelmän hot-start-Taq-entsyymille, mikä parantaa huomattavasti monistusherkkyyttä ja spesifisyyttä.Samaan aikaan tämä tuote on syvästi optimoinut monireaktiopuskurin, mikä voi parantaa reaktion vahvistustehokkuutta ja edistää matalapitoisten mallien tehokasta vahvistusta.Tätä tuotetta voidaan käyttää genotyypitykseen ja moninkertaiseen kvantitatiiviseen analyysiin.
Erittely
| Hot Start | Sisäänrakennettu kuumakäynnistys |
| Havaitsemismenetelmä | Primer-sondin tunnistus |
| PCR-menetelmä | qPCR |
| Polymeraasi | Taq DNA-polymeraasi |
| Näytteen tyyppi | DNA |
Varastointiolosuhteet
Tuote toimitetaan kuivajään kanssa ja sitä voidaan säilyttää -25 ~ -15 ℃ lämpötilassa 2 vuotta.
Ohjeet
1. ReaktioJärjestelmä
| Komponentit | Tilavuus (μL) | Lopullinen keskittyminen |
| 2× TaqMan multiplex qPCR Master Mix | 12.5 | 1× |
| Pohjusteseos (10 μmol/l) a | × | 0,1 - 0,5 μmol/l |
| Anturin seos (10 μmol/l)b | × | 50 - 250 nmol/l |
| Rox-referenssiväri | 0.5 | 1× |
| Templaatti-DNA/cDNA | 1-10 | - |
| ddH2O | 25 asti | - |
Huomautuksia:Sekoita huolellisesti ennen käyttöä välttääksesi liiallisia kuplia voimakkaasta ravistuksesta.
a.Pohjustekonsentraatio: Primer Mix sisältää useita alukkeita, yleensä jokaisen alukkeen lopullisessa pitoisuudessa 0,2 μmol/L ja sitä voidaan myös säätää välillä 0,1 - 0,5 μmol/L tarpeen mukaan.
b.Anturin pitoisuus: Probe Mix sisältää useita koettimia, joilla on erilaiset fluoresenssisignaalit, ja kunkin koettimen pitoisuutta voidaan säätää välillä 50 - 250 nmol/L tilanteen mukaan.
1.Rox-väriaineviite: Sitä käytetään Real Time PCR -amplifikaatioinstrumentissa, kuten Applied Biosystemsissä, korjaamaan kuoppien välissä generoidun fluoresenssisignaalin virhe;tämä tuote ei sisällä Rox-väriainetta.Cas#10200 suositellaan tarvittaessa.
2.Mallin laimennus: qPCR on erittäin herkkä, ja malline on suositeltavaa laimentaa käyttöä varten.Jos templaatti on cDNA-kantaliuos, templaatin tilavuus ei saa ylittää 1/10 kokonaistilavuudesta.
3.Reaktiojärjestelmä: 25 μL, 30 μL tai 50 μL suositellaan varmistamaan kohdegeenin monistumisen tehokkuus ja toistettavuus.
4.Järjestelmän valmistelu: Valmistele erittäin puhtaalla pöydällä ja käytä kärkiä ja reaktioputkia ilman nukleaasijäämiä;on suositeltavaa käyttää kärkiä suodatinpatruunoiden kanssa.Vältä ristikontaminaatiota ja aerosolikontaminaatiota.
2.Reaktio-ohjelma
| Kierrä vaihe | Temp. | Aika | Pyörät |
| Alkudenaturointi | 95 ℃ | 5 minuuttia | 1 |
| Denaturaatio | 95 ℃ | 15 sek | 45 |
| Hehkutus/pidennys | 60 ℃ | 30 sekuntia |
Huomautuksia:
1.Hehkutus/pidennys: Lämpötilaa ja aikaa voidaan säätää sopivasti suunnitellun pohjamaalin Tm-arvon mukaan.
2.Fluoresenssisignaalin hankinta: Eri qPCR-ilmaisuinstrumenttien vaatima fluoresenssisignaalin hakuaika on erilainen, aseta minimiaikarajan mukaan.Useiden yleisten instrumenttien aika asetetaan seuraavasti:
20 s: Applied Biosystems 7700, 7900HT, 7500 Fast
31 s: Applied Biosystems 7300
32 s: Applied Biosystems 7500
Huomautuksia
Käytä tarvittavia henkilönsuojaimia, kuten laboratoriotakkia ja käsineitä terveytesi ja turvallisuutesi varmistamiseksi!
