Superstart qPCR Premix plus-UNG
Kissanumero: HCB5071E
Superstart qPCR Premix plus-UNG on erikoisreagenssi, joka on suunniteltu reaaliaikaisiin PCR:n kvalitatiivisiin ja kvantitatiivisiin reaktioihin, joissa käytetään koetinpohjaista havaitsemista ja joka on kehitetty erityisesti lyofilisointiprosesseja varten.Se sisältää uuden kuumakäynnistysentsyymin Hotstart Taq plus (DG), jonka Taq-entsyymiaktiivisuus on suljettu huoneenlämmössä, mikä estää tehokkaasti alukkeen epäspesifisen pariutumisen tai alukkeen dimeerin muodostumisen aiheuttamaa epäspesifistä monistumista alhaisissa lämpötiloissa ja parantaa näin monistusreaktion spesifisyys.Tämä reagenssi käyttää optimoitua qPCR-spesifistä puskuria ja UNG/dUTP-kontaminaationestojärjestelmää nopean kuumakäynnistyksen saavuttamiseksi, mikä parantaa huomattavasti qPCR-reaktioiden tehokkuutta ja herkkyyttä.Se voi saada hyvät standardikäyrät monilla kvantitointialueilla ja suorittaa kvantifioinnin tarkasti, mikä estää tehokkaasti väärän positiivisen monistumisen, jonka aiheuttavat jäännös-PCR-tuotteet tai aerosolikontaminaatio.Tämä reagenssi on yhteensopiva useimpien fluoresoivien kvantitatiivisten PCR-laitteiden kanssa valmistajilta, kuten Applied Biosystems, Eppendorf, Bio-Rad ja Roche jne., ja sillä on hyvä stabiilisuus lyofilisoidussa muodossa.
Reagenssin koostumus
1. 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+ilmainen) (PO)
2. 250 mM MgCl2
3. 4 × lyoprotectant (valinnainen)
Varastointiolosuhteet
Pitkäaikainen varastointi -20 ℃;voidaan säilyttää 4 ℃:ssa jopa 3 kuukautta.Sekoita hyvin ennen käyttöä jaVältä toistuvaa jäätymistä ja sulattamista.
Pyöräilyprotokolla
| Menettely | Temp. | Aika | Kierrä |
| Ruoansulatus | 50℃ | 2 min | 1 |
| Polymeraasin aktivointi | 95℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturointi | 95℃ | 10-20 s | 40-50 |
| Hehkutus ja pidennys | 56-64 ℃ | 20-60 s | 40-50 |
qPCR Liquid Reaction Syvarren valmistus
|
Sävellys |
25 µl tilavuus |
50 µl tilavuus |
Lopullinen keskittyminen |
| 5×HotstartPremix plus-UNG(Mg2+ilmainen) (PO) | 5 µl | 10 µl | 1× |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µl | 0,9 µl | 4,5 mM |
| 4 × lyoprotektantti1 | 6,25 ui | 12,5 µl | 1× |
| 25 × Primer-Probe Mix2 | 1 µl | 2 µl | 1× |
| Malli-DNA3 | —— | —— | —— |
| ddH2O | 25 µl:aan | 50 µl asti | —— |
1. Alukkeiden lopullinen pitoisuus 0,2 μM tuottaa yleensä hyviä tuloksia;kun reaktion suorituskyky on huono, säädä alukepitoisuutta välillä 0,2-1 μM tarpeen mukaan.Koettimen pitoisuus optimoidaan tyypillisesti alueella 0,1-0,3 μM gradienttikokeiden avulla optimaalisten yhdistelmien löytämiseksi.
2. Erityyppisten templaattien sisältämien kohdegeenien kopiomäärä vaihtelee;tarvittaessa voidaan suorittaa gradienttilaimennus optimaalisen templaatin lisäysmäärän määrittämiseksi.
3. Tämä järjestelmä voidaan lyofilisoida;kun asiakkaat käyttävät tätä järjestelmää ilman pakastekuivausvaatimuksia, 4 × lyoprotectant-ainetta voidaan lisätä valikoivasti; jos pakastekuivattuja tuotteita tarvitaan, nestemäisten reagenssien vaiheen tuotteen suorituskyvyn validoinnin aikana sen on lisättävä 4 × kylmäsuojausainetta varmistaakseen johdonmukaisuuden lyofilisoitujen järjestelmän komponenttien kanssa. ja tehosteet.
Kun järjestelmä on käytössäd pakastekuivausta varten valmistele järjestelmä as seurata:
| Sävellys | 25µl Reaktiojärjestelmä |
| 5 × HotstartPremix plus-UNG (Mg2+ilmainen) (PO) | 5 µl |
| 250 mM MgCl2 | 0,45 µl |
| 4 × lyoprotektantti | 6,25 ui |
| 25 × Primer-Probe Mix | 1 µl |
| ddH2O | 18-20 µl |
* Jos tarvitaan muita pakastekuivausjärjestelmiä, ota yhteyttä erikseen.
Lyofilisointiprosessiss
| Menettely | Temp. | Aika | Kunto | Paine |
| Esipakastus | 4℃ | 30 min | Pidä |
1 atm |
| -50 ℃ | 60 min | Jäähdytys | ||
| -50 ℃ | 180 min | Pidä | ||
| Ensisijainen kuivaus | -30℃ | 60 min | Lämmitys |
Lopullinen tyhjiö |
| -30℃ | 70 min | Pidä | ||
| Toissijainen kuivaus | 25℃ | 60 min | Lämmitys |
Lopullinen tyhjiö |
| 25℃ | 300 min | Pidä |
2. Yllä oleva lyofilisointiprosessi on tarkoitettu vain viitteeksi.Eri tuotetyypeillä ja eri pakastekuivareilla on erilaiset parametrit, joten säätöjä voidaan tehdä todellisen mukaanolosuhteet käytön aikana.
3. Erilaiset lyofilisointiprosessit voivat olla sopivia lyofilisoidun eri eräkokoilletuotteita, joten riittävä testausvalidointi on suoritettava, kun niitä käytetään laajamittaisessa tuotannossa.
Lyofilisoinnin käyttöohjeetd jauhetta
1. Sentrifugoi lyofilisoitua jauhetta lyhyesti;
2. Lisää nukleiinihappotemplaatti lyofilisoituun jauheeseen ja lisää vettä 25 µl:aan asti;
3. Sekoita hyvin sentrifugoimalla ja aja koneella.
Laadunvalvonta:
1. Toiminnallinen testaus: qPCR:n herkkyys, spesifisyys, toistettavuus.
2. Ei eksogeenistä nukleaasiaktiivisuutta, ei eksogeenistä endo/eksonukleaasikontaminaatiota.
Tekninen informaatio:
1. Superstart qPCR Premix plus-UNG käyttää uutta kuumakäynnistysentsyymiä, joka mahdollistaa nopean kuumakäynnistyksen 1–5 minuutissa;erityisellä puskuriformulaatiolla se soveltuu moninkertaisiin fluoresoiviin kvantitatiivisiin PCR-reaktioihin.
2. Sillä on korkeampi spesifisyys, mikä parantaa merkittävästi fluoresenssin kvantitatiivisen PCR-rajan havaitsemisen herkkyyttä, jolloin monistuskäyrät normalisoituvat, fluoresenssiarvot saavat ilmeisen parannuksen pienillä pitoisuuksilla templaatteilla, jotka sopivat korkean herkkyyden fluoresenssikvantitatiivisiksi PCR-detektioreagensseiksi.
3. Alukkeille, joilla on alempi pariutumislämpötila tai yli 200 bp:n fragmentit, suositellaan 3-vaiheista menetelmää.
4. dUTP:n hyötysuhde ja herkkyys UNG-entsyymille vaihtelevat eri kohdegeeneillä, joten jos UNG-järjestelmän käyttö johtaa havaitsemisherkkyyden heikkenemiseen, reaktiojärjestelmää tulee säätää ja optimoida.Jos tarvitset teknistä tukea, ota yhteyttä yritykseemme.
5. Käytä erityisiä alueita ja pipettejä ennen vahvistusta ja sen jälkeen, käytä käsineitä käytön aikana ja vaihda ne usein;älä avaa reaktioputkea PCR:n päätyttyä minimoidaksesi näytteiden kontaminoitumisen PCR-tuotteista.
