One Step RT-qPCR SYBR Green Premix
Cat nro: HCB5140A
One Step RT-qPCR Syber Green Premix on tarkoitettu fluoresenssin kvantifiointiin, joka perustuu SYBR Green I -väriaineeseen.Geenispesifisiä alukkeita käyttämällä käänteistranskriptio ja qPCR-reaktiot suoritetaan yhdessä putkessa, mikä eliminoi toistuvien korkin avaamis- ja pipetointitoimenpiteiden tarpeen, parantaa huomattavasti määrityksen tehokkuutta ja vähentää kontaminaatioriskiä.RNA-näytteitä varten pakkauksessa käytetään lämmönkestävää käänteistranskriptaasia tehokkaaseen cDNA-synteesiin ja HotStart Taq DNA -polymeraasia kvantitatiiviseen monistamiseen.Optimoidussa puskurijärjestelmässä pakkauksen herkkyys voi olla jopa 0,1 pg voimakkaasti ilmentyville kohteille ja jopa 1 pg kohtalaisesti ilmentyville kohteille.Sarja soveltuu DNA-näytteiden monistamiseen ja kvantifiointiin.Se mahdollistaa nukleiinihappojen herkän havaitsemisen ja kvantifioinnin eri kasvi- ja eläinnäytteistä, soluista ja mikro-organismeista.
Komponentit
| No | Nimi | Äänenvoimakkuus | Äänenvoimakkuus |
| 1 | Kehittynyt puskuri | 250 µl | 2 x 1,25 ml |
| 2 | Kehittynyt entsyymisekoitus | 20 μl | 200 µl |
| 3 | RNaasi vapaa H2O | 250 µl | 2 x 1,25 ml |
Varastointiolosuhteet
Tämä tuote tulee säilyttää -25 ~ -15 ℃ valolta suojattuna 1 vuoden ajan.
Ohjeet
1.Reaktiojärjestelmän kokoonpanod
| Komponentit | Tilavuus (μL) | Tilavuus (μL) | Lopullinen keskittyminen |
| Kehittynyt puskuri | 12.5 | 25 | 1× |
| Kehittynyt entsyymisekoitus | 1 | 2 | - |
| Forward Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/l |
| Reverse Primer (10 μmol/L)a | 0.5 | 1 | 0,2 μmol/l |
| RNA Tamplateb | X | X | - |
| RNaasi vapaa H2Oc | 25 asti | 50:een | - |
Huomautuksia:
1) a.TLopullinen alukekonsentraatio oli 0,2 μmol/L, jota voitiin myös säätää välillä 0,1 - 1 μmol/L tarpeen mukaan.
2) b.Reagenssi on äärimmäisen herkkä, ja sen kokonais-RNA on välillä 1 pg-1 μg, ja ihmisnäytteiden testaus osoitti optimaalisen syöttöarvon 1 pg-100 ng, mikä kontrolloi kokonais-Ct-arvoa alueella 15-30 tarpeen mukaan.
3) c.On suositeltavaa käyttää 20 μL tai 50 μL kohdegeenin monistumisen validiteetin ja toistettavuuden varmistamiseksi.
4) d.Valmistaudu ultrapuhtaalla pöydällä ja käytä nukleaasijäämättömiä kärkiä ja reaktioputkia;suodatinpatruunoilla varustettuja vinkkejä suositellaan.Vältä ristikontaminaatiota ja aerosolikontaminaatiota.
2.Reaktio-ohjelma
| Kierrä vaihe | Temp. | Aika | Pyörät |
| Käänteinen transkriptio | 50℃a | 6 minuuttia | 1 |
| Alkudenaturaatio | 95℃ | 5 minuuttia | 1 |
| Monistusreaktio | 95℃ | 15 sek | 40 |
| 60℃b | 30 sek | ||
| Sulamiskäyrän vaihe | Instrumentin oletusasetukset | 1 | |
Huomautuksia:
1) a.Käänteistranskription lämpötila voidaan valita välillä 50-55°C kokeellisten tarpeiden mukaan.DNA-näytteiden osalta käänteistranskriptioprosessi voidaan jättää pois.
2) b.Erikoistapauksissa hehkutus/pidennyslämpötilaa voidaan säätää pohjamaalin Tm-arvon mukaan, suositellaan 60°C.
Huomautuksia
1. Tämä tuote on tarkoitettu vain tutkimuskäyttöön.
2. Käytä turvallisuutesi vuoksi laboratoriotakkeja ja kertakäyttökäsineitä.
