DNaasi I (Rnase-vapaa) (5 u/ul)
Cat nro: HC4007A
DNaasi I (deoksiribonukleaasi I) on endodeoksiribonukleaasi, joka pystyy pilkkomaan yksi- tai kaksijuosteista DNA:ta.Se tunnistaa ja katkaisee fosfodiesterisidoksia tuottaakseen monodeoksinukleotideja tai yksi- tai kaksijuosteisia oligodeoksinukleotidejä, joissa on fosfaattiryhmiä 5'-päässä ja hydroksyyliä 3'-päässä.DNaasi I:n aktiivisuus riippuu Ca2+ja ne voidaan aktivoida kaksiarvoisilla metalli-ioneilla, kuten Mn2+ja Zn2+.5 mM Ca2+suojaa entsyymiä hydrolyysiltä.Mg:n läsnä ollessa2+, entsyymi voisi satunnaisesti tunnistaa ja katkaista minkä tahansa kohdan mistä tahansa DNA-juosteesta.Mn:n läsnä ollessa2+DNA:n kaksoisjuosteet voidaan tunnistaa ja pilkkoa samanaikaisesti lähes samasta kohdasta, jolloin muodostuu tasapäisiä DNA-fragmentteja tai tahmeapäisiä DNA-fragmentteja, joissa on 1-2 nukleotidia.
Komponentit
| Nimi | 0.1KU | 1KU | 5 KU | 50 KU |
| DNaasi I, RNaasi-vapaa | 20 μl | 200μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNaasi I -puskuri | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 x 10 ml |
Varastointiolosuhteet
-25 ℃ ~ -15 ℃ varastointiin;Kuljetus jääpakkausten alla.
Ohjeet
1. Valmista reaktioliuos RNaasi-vapaaseen putkeen alla lueteltujen suhteiden mukaisesti:
| Komponentti | Äänenvoimakkuus |
| RNA | X µg |
| 10 × DNAase I -puskuri | 1 μl |
| DNaasi I, RNaasivapaa (5U/μL) | 1 U per µg RNA① |
| ddH2O | Jopa 10 μl |
Huomautus: ①Laske lisättävän DNaasi I:n tilavuus RNA:n määrän perusteella.
2. 37 ℃ 15 minuuttia;
3. Lisää 0,5 M EDTA:ta lopulliseen pitoisuuteen 2,5 mM - 5 mM ja kuumenna 65 °C:ssa 10 minuuttia reaktion pysäyttämiseksi.Näytettä voidaan käyttää suoraan seuraavaan reaktioon, kuten käänteistranskriptioonkoe.
Yksikön määritelmä
Yksi yksikkö määritellään entsyymimääräksi, joka hajottaa täysin 1 ug pBR322:taDNA 10 minuutissa 37 ℃.
Laadunvalvonta
RNaasi:5 U DNaasi I:tä 1,6 µg:lla MS2 RNA:ta 4 tunnin ajan 37 ℃:ssa ei aiheuta hajoamista.määritetään agaroosigeelielektroforeesilla.
Huomautuksia
1. Valmista 0,5MEDTA itse.
2. Käytä 1U DNaasi I per µg RNA:ta.Jos RNA:ta on kuitenkin alle 1 µg, käytä 1U DNaasi I:tä.
3. Aseta entsyymi jäälle käytön aikana.
