BspQI
BspQI:tä voidaan ekspressoida rekombinanttisesti E. colissa, joka pystyy tunnistamaan spesifisiä kohtia ja joita tuotetaan alla
BspQI, IIs-restriktioendonukleaasirestriktioendonukleaasi, on peräisin rekombinantista E. coli -kannasta, joka kantaa Bacillus sphaericus -bakteerin kloonattua ja modifioitua BspQI-geeniä.Se voi tunnistaa tietyt kohdat, ja tunnistussekvenssit ja katkaisukohdat ovat seuraavat:
5' · · · ·GCTCTTC(N) · · · · · · · · · · · 3'
3' · · · · CGAGAAG(NNNN) · · · · 5'
Tuotteen ominaisuudet
1. Korkea aktiivisuus, nopea ruoansulatus;
2. Matala tähtiaktiivisuus, joka varmistaa tarkan leikkauksen kuten "veitsen";
3. Ilman BSA:ta ja eläinperäistä vapaata;
Metylaatioherkkyys
Dolen metylaatio:Ei herkkä;
Dcm metylaatio:Ei herkkä;
CpG-metylointi:Ei herkkä;
Varastointiolosuhteet
Tuote tulee lähettää ≤ 0 ℃;Säilytä -25-15 ℃ lämpötilassa.
Tallennuspuskuri
20 mM Tris-HCl, 0,1 mM EDTA, 500 mM KCl, 1,0 mM ditiotreitolia, 500 ug/ml rekombinanttialbumiinia, 0,1 % Trition X-100 ja 50 % glyserolia (pH 7,0 @ 25 °C).
Yksikön määritelmä
Yksi yksikkö määritellään entsyymimääräksi, joka tarvitaan pilkkomaan 1 ug sisäistä kontrolli-DNA:ta 1 tunnissa 50 °C:ssa 50 ui:n kokonaisreaktiotilavuudessa.
Laadunvalvonta
Proteiinin puhtausmääritys (SDS-PAGE):BspQI:n puhtaus määritettiin SDS-PAGE-analyysillä >95 %.
RNaasi:10 U BspQI:tä ja 1,6 μg MS2 RNA:ta 4 tunnin ajan 50 ℃:ssa ei tuota hajoamista agaroosigeelielektroforeesilla määritettynä.
Ei-spesifinen DNAase-aktiivisuus:10 U BspQI:tä, jossa on 1 μg λ DNA:ta 50 °C:ssa 16 tunnin ajan verrattuna 50 °C:seen 1 tunnin ajan, ei tuota ylimääräistä DNA:ta agaroosigeelielektroforeesilla määritettynä.
Ligaatio ja leikkaus:Kun 1 μg λDNA:ta on pilkottu 10 U:lla BspQI:tä, DNA-fragmentit voidaan liittää T4 DNA-ligaasilla 16 ºC:ssa.Ja nämä ligatoidut fragmentit voidaan leikata uudelleen BspQI:llä.
E. coli DNA: E. coli 16s:n rDNA-spesifinen TaqMan qPCR -detektio osoitti, että E. colin genomijäännös oli ≤ 0,1 pg/ul.
Isäntäproteiinijäännös:≤ 50 ppm
Bakteeri Endotoksiini: LAL-testi, Kiinan farmakopean IV 2020 painoksen mukaan, geelirajatestimenetelmä, yleissääntö (1143).Bakteerien endotoksiinipitoisuuden tulee olla ≤10 EU/mg.
Reaktiojärjestelmä ja olosuhteet
| Komponentti | Äänenvoimakkuus |
| BspQ I (10 U/μL) | 1 μl |
| DNA | 1 μg |
| 10 x BspQ I -puskuri | 5 μl |
| dd H2O | Jopa 50 μl |
Reaktioolosuhteet: 50 ℃, 1-16 h.
Lämpöinaktivointi: 80°C 20 min.
Suositeltu reaktiojärjestelmä ja olosuhteet voivat tarjota suhteellisen hyvän entsyymihajotusvaikutuksen, mikä on vain viitteellistä, katso lisätietoja kokeellisista tuloksista.
Tuotesovellus
Restriktioendonukleaasidigestio, nopea kloonaus.
Huomautuksia
1. Entsyymin tilavuus ≤ 1/10 reaktiotilavuudesta.
2. Tähtiaktiivisuutta voi esiintyä, kun glyserolipitoisuus on yli 5 %.
3. Hajoamisaktiivisuutta voi esiintyä, kun substraatti on alle suositellun suhteen.
