UDG/UNG-entsyymit
UDG (urasiili-DNA-glykosylaasi) voi katalysoida N-glykosidisidoksen hydrolyysiä urasiiliemäksen ja sokerifosfaattirungon välillä ssDNA:ssa ja dsDNA:ssa.Se hallitsee helposti aerosolien saastumista ja sopii yleisiin molekyylibiologian järjestelmiin, kuten PCR, qPCR, RT-qPCR ja LAMP.
Tekniset tiedot
| Expression Host | Rekombinantti E. coli urasiili-DNA-glykosylaasigeenin kanssa |
| Molekyylipaino | 24. 8 kDa |
| Puhtaus | ≥95 % (SDS-PAGE) |
| Lämmön poisto | 95℃, 5-10 min |
| Yksikön määritelmä | Yksi yksikkö (U) määritellään entsyymimääräksi, joka tarvitaan katalysoimaan 1 μg dU:ta sisältävän dsDNA:n hydrolyysi 30 minuutissa 25 ℃:ssa. |
Varastointi
Tuote tulee säilyttää -25℃~-15°C:ssa kahden vuoden ajan.
Ohjeet
1.PCR-reaktioseoksen valmistus seuraavan järjestelmän mukaisesti
| Komponentit | Tilavuus (μL) | Lopullinen keskittyminen |
| 10 × PCR-puskuri (Mg²+Plus) | 5 | 1× |
| 25 mmol/LMgCl | 3 | 1,5 mmol/l |
| dUTP (10 mmol/L) | 3 | 0,6 mmol/l |
| dCTP/dGTP/dATP/dTTP (10 mmol/uutto) | 1 | 0,2 mmol/uutto |
| Malli-DNA | X | - |
| Primer1 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/l |
| Primer 2 (10 μmol/L) | 2 | 0,4 μmol/l |
| Taq DNA -polymeraasi (5 U/μl) | 0. 5 | 0,05 U/μL |
| Urasiili DNA-glykosylaasi (UDG/UNG), 1 U/μl | 1 | 1 U/μl |
| ddH2O | Jopa 50 | - |
Huomautus: Kokeellisten vaatimusten mukaisesti dUTP:n lopullinen pitoisuus voidaan säätää välille 0,2-0,6 mmol/L ja dTTP:tä voidaan lisätä valikoivasti 0,2 mmol/L.
2.Vahvistusmenettely
| Kierrä vaihe | Lämpötila | Aika | Pyörät |
| dU:ta sisältävä mallin hajoaminen | 25℃ | 10 minuuttia | 1 |
| UDG-aktivointi, mallin alkuperäinen denaturointi | 95℃ | 5-10 minuuttia | 1 |
| Denaturaatio | 95℃ | 10 sek |
30-35 |
| Hehkutus | 60℃ | 20 sekuntia | |
| Laajennus | 72℃ | 30 s/kb | |
| Lopullinen laajennus | 72℃ | 5 min | 1 |
Huomautus: Reaktioaikaa 25 °C:ssa voidaan säätää 5-10 minuutin sisällä kokeellisten vaatimusten mukaisesti.
Huomautuksia
1.UDG on aktiivinen useimmissa PCR-reaktiopuskureissa.
2.Entsyymit tulee varastoida jääkaappiin tai jäähauteeseen käytettäessä, ja ne tulee säilyttää -20°C:ssa välittömästi käytön jälkeen.
3.Käytä tarvittavia henkilönsuojaimia, kuten laboratoriotakkia ja käsineitä terveytesi ja turvallisuutesi varmistamiseksi!
