Yleiskäyttöinen SYBR GREEN qPCR Premix (sininen)

Cat nro: HCB5041B

Universal Blue qPCR Master Mix (Dye Based) on esiratkaisu kaksinkertaiseen reaaliaikaiseen kvantitatiiviseen PCR-monistukseen, jolle on tunnusomaista korkea herkkyys ja spesifisyys, se on väriltään sininen ja sillä on näytteen lisäyksen jäljitysvaikutus.Ydinkomponentti Taq DNA -polymeraasi käyttää vasta-aineen kuumakäynnistystä estämään tehokkaasti epäspesifistä monistumista, joka johtuu alukkeen pariutumisesta näytteen valmistuksen aikana.Samaan aikaan kaava lisää edistäviä tekijöitä PCR-reaktion monistustehokkuuden parantamiseksi ja eri GC-pitoisuuksien (30 ~ 70 %) geenien monistumisen tasoittamiseksi, jotta kvantitatiivisella PCR:llä voidaan saada hyvä lineaarinen suhde laajassa kvantitatiivisessa tilassa. alueella.Tämä tuote sisältää erityistä ROX Passive Reference Dye -väriä, jota voidaan käyttää useimpiin qPCR-instrumentteihin.ROX-pitoisuutta ei tarvitse säätää eri laitteissa.On vain tarpeen lisätä alukkeita ja templaatteja reaktiojärjestelmän valmistamiseksi monistusta varten.

Komponentit

Universal Blue qPCR Master Mix

Varastointiolosuhteet

Tuote toimitetaan jääpakkausten kanssa ja sitä voidaan säilyttää -25 ℃ ~ -15 ℃ lämpötilassa 18 kuukautta.On välttämätöntä välttää voimakasta valosäteilyä reaktiojärjestelmää varastoitaessa tai valmistettaessa.

Erittely

Ohjeet

1. Reaktiojärjestelmä

[Huom.]: Sekoita huolellisesti ennen käyttöä, jotta vältytään voimakkaasta ravistuksesta aiheutuvien liiallisten kuplien muodostumiselle.

a) Alukkeen pitoisuus: Lopullinen alukepitoisuus on 0,2 μmol/L, ja sitä voidaan myös säätää välillä 0,1 - 1,0 μmol/L tarpeen mukaan.

b) Templaattikonsentraatio: Jos templaatti on laimentamaton cDNA-varastoliuos, käytetyn tilavuuden ei tulisi ylittää 1/10 qPCR-reaktion kokonaistilavuudesta.

c) Templaattilaimennus: On suositeltavaa laimentaa cDNA-kantaliuos 5-10 kertaa.Optimaalinen lisätyn templaatin määrä on parempi, kun amplifikaatiolla saatu Ct-arvo on 20-30 sykliä.

d) Reaktiojärjestelmä: On suositeltavaa käyttää 20 µl tai 50 µl kohdegeenin monistumisen tehokkuuden ja toistettavuuden varmistamiseksi.

e) Järjestelmän valmistelu: Valmistele erittäin puhtaalla pöydällä ja käytä kärkiä ja reaktioputkia ilman nukleaasijäämiä;on suositeltavaa käyttää kärkiä suodatinpatruunoiden kanssa.Vältä ristikontaminaatiota ja aerosolikontaminaatiota.

2.Reaktio-ohjelma

Vakioohjelma

Pikaohjelma

[Huom.]: Nopea ohjelma sopii suurimmalle osalle geeneistä, ja standardiohjelmia voidaan kokeilla yksittäisille monimutkaisille sekundäärirakenteen geeneille.

a) Hehkutuslämpötila ja -aika: Säädä alukkeen ja kohdegeenin pituuden mukaan.

b) Fluoresenssisignaalin hankinta (★): Aseta kokeellinen menettely laitteen käyttöohjeiden vaatimusten mukaisesti.

c) Sulamiskäyrä: Laitteen oletusohjelmaa voidaan käyttää normaalisti.

3. Tulosanalyysi 

Kvantitatiivisiin kokeisiin vaadittiin vähintään kolme biologista toistoa.Reaktion jälkeen vahvistuskäyrä ja sulamiskäyrä on vahvistettava.

3.1 Vahvistuskäyrä:

Vakiovahvistuskäyrä on S-muotoinen.Kvantitatiivinen analyysi on tarkin, kun Ct-arvo on 20 ja 30 välillä. Jos Ct-arvo on alle 10, on tarpeen laimentaa malli ja suorittaa testi uudelleen.Kun Ct-arvo on välillä 30-35, on tarpeen lisätä templaattipitoisuutta tai reaktiosysteemin tilavuutta, jotta amplifikaatiotehokkuus paranee ja tulosanalyysin tarkkuus varmistetaan.Kun Ct-arvo on suurempi kuin 35, testituloksilla ei voida kvantitatiivisesti analysoida geenin ilmentymistä, mutta niitä voidaan käyttää kvalitatiiviseen analyysiin.

3.2 Sulamiskäyrä:

Sulamiskäyrän yksittäinen piikki osoittaa, että reaktion spesifisyys on hyvä ja kvantitatiivinen analyysi voidaan suorittaa;jos sulamiskäyrässä on kaksi tai useampia huippuja, kvantitatiivista analyysiä ei voida suorittaa.Sulamiskäyrä näyttää kaksoispiikkejä, ja on tarpeen arvioida, onko ei-kohdepiikki alukedimeeriä vai ei-spesifistä monistusta DNA-agaroosigeelielektroforeesilla.Jos kyseessä on alukedimeeri, on suositeltavaa vähentää alukepitoisuutta tai suunnitella uudelleen alukkeet, joilla on korkea amplifikaatiotehokkuus.Jos kyseessä on epäspesifinen monistus, nosta pariutumislämpötilaa tai suunnittele alukkeet uudelleen spesifisesti.

Huomautuksia

Käytä tarvittavia henkilönsuojaimia, kuten laboratoriotakkia ja käsineitä terveytesi ja turvallisuutesi varmistamiseksi!

Tämä tuote on VAIN tutkimuskäyttöön!