Ultra Nuclease
UltraNuclease on geneettisesti muokattu endonukleaasi, joka on peräisin Serratia marcescensistä, joka pystyy hajottamaan DNA:ta tai RNA:ta, joko kaksi- tai yksijuosteista, lineaarista tai pyöreää useissa eri olosuhteissa, hajottamaan nukleiinihapot täydellisesti 5'-monofosfaattioligonukleotideiksi, joiden pituus on 3-5 emaasi. .Geenitekniikan muokkauksen jälkeen tuote fermentoitiin, ekspressoitiin ja puhdistettiin Escherichia colissa (E. coli), mikä vähentää solusupernatantin ja solulysaatin tieteellisen tutkimuksen viskositeettia, mutta myös parantaa proteiinin puhdistustehokkuutta ja toiminnallista tutkimusta.Sitä voidaan käyttää myös geeniterapiassa, virusten puhdistuksessa, rokotteiden valmistuksessa, proteiini- ja polysakkaridien lääketeollisuudessa isäntäjäännöksen nukleiinihaponpoistoreagenssina.
Tuotteen ominaisuudet
| CAS-nro | 9025-65-4 |
| EY-nro | |
| Molekyylipaino | 30 kDa |
| Isoelektrinen piste | 6.85 |
| Proteiinin puhtaus | ≥99 % (SDS-PAGE & SEC-HPLC) |
| Erityinen toiminta | ≥1.1 × 106 U/mg |
| Optimaalinen lämpötila | 37 °C |
| Optimaalinen pH | 8.0 |
| ProteaseActivity | negatiivinen |
| Bioburden | ＜10 CFU / 100 000 U |
| Isäntäsolun jäännösproteiini | ≤10 ppm |
| Hevimetalli | ≤10 ppm |
| Bakteerien endotoksiini | ＜0,25EU/1000U |
| Tallennuspuskuri | 20 mM Tris-HCl, pH 8,0, 2 mM MgCl2, 20 mM NaCl, 50 % glyseroli |
Varastointiolosuhteet
≤0°C kuljetus；-25~-15°C Säilytys, 2 vuotta voimassa (vältä jäätymistä-sulatusta).
Yksikön määritelmä
Aktiiviseksi yksiköksi (U) määriteltiin entsyymimäärä, jolla muutettiin △A260:n absorptioarvoa 1,0:lla 30 minuutissa 37 °C:ssa, pH 8,0:ssa, mikä vastaa pilkkottua 37 μg lohen siittiöiden DNA:ta leikkaamalla oligonukleotideiksi.
Laadunvalvonta
Isäntäsolun jäännösproteiini: ELISA-sarja
•Proteaasi Jäämät: 250 KU/ml UltraNuclease reagoi substraatin kanssa 60 minuuttia, aktiivisuutta ei havaittu.
•Bakteerien endotoksiini: LAL-testi, Kiinan kansantasavallan farmakopea, osa 4 (2020 painos) geelirajatestimenetelmä.Yleiset säännöt (1143).
•Biotaakka: Kiinan kansantasavallan farmakopea, osa 4 (2020 painos) – Yleistä
Steriilisyystestin säännöt (1101), Kiinan kansallinen standardi, GB 4789.2-2016.
•Hevimetalli:ICP-AES, HJ776-2015.
Operaatio
UltraNuclease-aktiivisuus estyi merkittävästi, kun SDS-pitoisuus oli yli 0,1 % tai EDTA
pitoisuus oli yli 1 mM. Pinta-aktiivisella aineella Triton X-100, Tween 20 ja Tween 80 ei ollut vaikutusta nukleaasiin
ominaisuuksia, kun pitoisuus oli alle 1,5 %.
| Operaatio | Optimaalinen toiminta | Kelvollinen toiminta |
| Lämpötila | 37℃ | 0-45℃ |
| pH | 8,0-9,2 | 6,0-11,0 |
| Mg2+ | 1-2 mM | 1-15 mM |
| DTT | 0-100mM | >100mM |
| 2-merkaptoetanoli | 0-100mM | >100mM |
| Yksiarvoinen metalli-ioni (Na+, K+ jne.) | 0-20 mM | 0-200 mM |
| PO43- | 0-10 mM | 0-100mM |
Käyttö ja annostus
• Poista eksogeeninen nukleiinihappo rokotetuotteista, vähennä jäännösnukleiinihappotoksisuuden riskiä ja paranna tuoteturvallisuutta.
• Vähennä nukleiinihapon aiheuttamaa rehunesteen viskositeettia, lyhennä käsittelyaikaa ja lisää proteiinisaantoa.
• Poista nukleiinihappo, joka kietoi hiukkasen (virus, inkluusiokappale jne.), joka on edistävä
hiukkasen vapautumiseen ja puhdistamiseen.
| Kokeellinen tyyppi | Proteiinin tuotanto | Virus, rokote | Solulääkkeet |
| Solujen lukumäärä | 1g solun märkäpaino (suspendoitu uudelleen 10 ml puskuriin) | 1L fermentointi nestemäinen supernatantti | 1 l kulttuuria |
| Minimiannostus | 250U | 100U | 100U |
| Suositeltu annostus | 2500U | 25000U | 5000U |
• Nukleaasikäsittely voi parantaa näytteen erottelukykyä ja talteenottoa pylväskromatografiaa, elektroforeesia ja blot-analyysiä varten.
• Geeniterapiassa nukleiinihappoa poistetaan puhdistettujen adeno-assosioituneiden virusten saamiseksi.
