ylpeä
Tuotteet
Proteinase K (neste) HC4502A Suositeltu kuva
  • Proteinaasi K (neste) HC4502A

Proteinaasi K (neste)


Luettelonumero: HC4502A

Pakkaus: 5ml/100ml/1l/10l

Ei sisällä DNaasi, RNaasi, Nickase

Aktiivisuus: ≥800 U/ml

Säilyvyys 3 vuotta

Yhden erän tilavuus 1500L (30kg)

 

Tuotteen Kuvaus

Tuotetiedot

Data

Luettelonumero: HC4502A

Proteinaasi K on stabiili seriiniproteaasi, jolla on laaja substraattispesifisyys.Se hajottaa monia proteiineja natiivitilassa jopa pesuaineiden läsnä ollessa.Kide- ja molekyylirakennetutkimuksista saadut todisteet osoittavat, että entsyymi kuuluu subtilisiinien perheeseen, jossa on aktiivisen kohdan katalyyttinen triadi (Asp39-Hänen69- Ser224).Vallitseva katkaisukohta on peptidisidos, joka on alifaattisten ja aromaattisten aminohappojen karboksyyliryhmän vieressä estettyjen alfa-aminoryhmien kanssa.Sitä käytetään yleisesti sen laajaspesifisyyttä.


  • Edellinen:
  • Seuraava:

  • Erittely

    Ulkomuoto

    Väritön tai vaaleanruskea neste

    Toiminta

    ≥800 U/ml

    Proteiinipitoisuus

    ≥20 mg/ml

    DNAase

    Ei havaittu

    RNaasi

    Ei havaittu

     

    Varastointiolosuhteet

    Säilytä 2-8 ℃ lämpötilassa.

     

    Ominaisuudet

    EY-numero

    3.4.21.64 (Rekombinantti Tritirachium albumista)

    Molekyylipaino

    29 kDa (SDS-PAGE)

    Isoelektrinen piste

    7.81

    Optimaalinen pH

    7,0-12,0 Kuva 1

    Optimaalinen lämpötila

    65 ℃ Kuva 2

    pH-stabiilisuus

    pH 4,5-12,5 (25 ℃, 16 h) Kuva 3

    Lämpöstabiilisuus

    Alle 50 ℃ (pH 8,0, 30 min) Kuva 4

    Aktivaattorit

    SDS, urea

    Inhibiittorit

    di-isopropyylifluorifosfaatti;fenyylimetyylisulfonyylifluoridi

     

    Sovellukset

    1. Geneettinen diagnostiikkasarja

    2. RNA- ja DNA-uuttosarjat

    3. Muiden kuin proteiinikomponenttien uuttaminen kudoksista, proteiiniepäpuhtauksien, kuten DNA-rokotteiden, hajottaminen ja hepariinin valmistus

    4. Kromosomi-DNA:n valmistus pulssielektroforeesilla

    5. Western blot

    6. Entsymaattiset glykosyloidut albumiinireagenssit in vitro -diagnoosi

     

    Varotoimenpiteet

    Käytä suojakäsineitä ja -laseja käytön tai punnituksen aikana ja pidä hyvä tuuletus käytön jälkeen.Tämä tuote voi aiheuttaa ihoallergisen reaktion ja vakavan silmien ärsytyksen.Hengitettynä se voi aiheuttaa allergia- tai astmaoireita tai hengenahdistusta.Saattaa aiheuttaa hengitysteiden ärsytystä.

     

    Määritys

    Yksikön määritelmä

    Yksi yksikkö (U) määritellään entsyymimääräksi, joka tarvitaan kaseiinin hydrolysoimiseen tuottamaan 1 μmol tyrosiinia minuutissa seuraavissa olosuhteissa.

     

    Reagenssien valmistus

    Reagenssi I: 1 g maitokeiiniä liuotettiin 50 ml:aan 0,1 M natriumfosfaattiliuosta (pH 8,0), inkuboitiin 65-70 ℃ vedessä 15 minuuttia, sekoitettiin ja liuotettiin, jäähdytettiin vedellä, säädettiin natriumhydroksidilla pH 8,0:aan ja kiinnitettiin tilavuus 100ml.

    Reagenssi II: TCA-liuos: 0,1 M trikloorietikkahappo, 0,2 M natriumasetaatti, 0,3 M etikkahappo.

    Reagenssi III: 0,4 M Na2CO3ratkaisu.

    Reagenssi IV: Fornt-reagenssi laimennettuna puhtaalla vedellä 5 kertaa.

    Reagenssi V: Entsyymilaimennusaine: 0,1 M natriumfosfaattiliuos (pH 8,0).

    Reagenssi VI: Tyrosiiniliuos: 0, 0,005, 0,025, 0,05, 0,075, 0,1, 0,25 umol/ml tyrosiinia liuotettuna 0,2 M HCl:ään.

     

    Menettely

    1. 0,5 ml reagenssia I esilämmitetään 37 ℃:seen, lisätään 0,5 ml entsyymiliuosta, sekoitetaan hyvin ja inkuboidaan 37 ℃:ssa 10 minuuttia.

    2. Lisää 1 ml reagenssia II reaktion pysäyttämiseksi, sekoita hyvin ja jatka inkubointia 30 minuuttia.

    3. Sentrifugoi reaktioliuos.

    4. Ota 0,5 ml supernatanttia, lisää 2,5 ml reagenssia III, 0,5 ml reagenssia IV, sekoita hyvin ja inkuboi 37 ℃:ssa 30 minuuttia.

    5. OD660määritettiin OD:ksi1;nollakoekontrolliryhmä: 0,5 ml reagenssia V käytetään korvaamaan entsyymiliuos OD:n määrittämiseksi660kuten OD2, ΔOD = OD1-OD2.

    6. L-tyrosiinin standardikäyrä: 0,5 ml eri konsentraatio L-tyrosiiniliuosta, 2,5 ml reagenssia III, 0,5 ml reagenssia IV 5 ml:n sentrifugiputkessa, inkuboi 37 ℃:ssa 30 minuuttia, havaitse OD660L-tyrosiinin eri konsentraatioille saatiin sitten standardikäyrä Y=kX+b, jossa Y on L-tyrosiinipitoisuus, X on OD600.

     

     Laskeminen

     

    2: Reaktioliuoksen kokonaistilavuus (ml)

    0,5: Entsyymiliuoksen tilavuus (ml)

    0,5: Kromogeenisessa määrityksessä käytetty reaktionesteen tilavuus (ml)

    10: Reaktioaika (min)

    Df: Laimennuskerroin

    C: Entsyymipitoisuus (mg/ml)

     

    Viitteet

    1. Wieger U & Hilz H. FEBS Lett.(1972);23:77.

    2. Wieger U & Hilz H. Biochem.Biophys.Res.Commun.(1971);44:513.

    3. Hilz, H.et ai.,euroaJ. Biochem.(1975);56:103–108.

    4. Sambrook Jet al., Molecular Cloning: Laboratory Manual, 2. painos, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor (1989).

     

    Kuvat

    Kuva. 1 Optimaalinen pH

    100 mM puskuriliuos: pH 6,0-8,0, Na-fosfaatti;pH 8,0 - 9,0, Tris-HCl;pH 9,0-12,5, glysiini-NaOH. Entsyymipitoisuus: 1 mg/ml

     

    Kuva 2 Optimaalinen lämpötila

    Reaktio 20 mM K-fosfaattipuskurissa pH 8,0.Entsyymipitoisuus: 1 mg/ml

     

    Kuvio 3 pH Vakaus

    25 ℃, 16 h-käsittely 50 mM puskuriliuoksella: pH 4,5-5,5, asetaatti;pH 6,0-8,0, Na-fosfaatti;pH 8,0-9,0, Tris-HCl.pH 9,0-12,5, glysiini-NaOH.Entsyymipitoisuus: 1 mg/ml

     

    Kuva 4 Lämpö vakautta

    30 min käsittely 50 mM Tris-HCl-puskurilla, pH 8,0.Entsyymipitoisuus: 1 mg/ml

     

    Kuva 5 Säilytys stability at 25℃

    Kirjoita viestisi tähän ja lähetä se meille