Hiiren genotyypityssarja

Kissanumero: HCR2021A

Tämä tuote on sarja, joka on suunniteltu hiiren genotyyppien nopeaan tunnistamiseen, mukaan lukien DNA:n raakauutto ja PCR-amplifikaatiojärjestelmä.Tuotetta voidaan käyttää PCR-monistukseen suoraan hiiren hännästä, korvasta, varpaista ja muista kudoksista yksinkertaisen katkaisun jälkeen lyysipuskurilla ja Proteinase k:llä.Ei yli yön digestiota, fenoli-kloroformiuuttoa tai pylväspuhdistusta, mikä on yksinkertaista ja lyhentää kokeiden aikaa vievää.Tuote soveltuu kohdefragmenttien amplifiointiin jopa 2 kb:iin asti ja multiplex-PCR-reaktioihin jopa 3 alukeparilla.2×Mouse Tissue Direct PCR Mix sisältää geneettisesti muokattua DNA-polymeraasia, Mg²⁺, dNTP:t ja optimoitu puskurijärjestelmä korkean amplifikaatiotehokkuuden ja inhibiittoritoleranssin aikaansaamiseksi, jotta PCR-reaktiot voidaan suorittaa lisäämällä templaattia ja alukkeita ja rehydratoimalla tuote 1x.Tällä tuotteella monistetussa PCR-tuotteessa on näkyvä "A"-emäs 3'-päässä, ja sitä voidaan käyttää suoraan TA-kloonaukseen puhdistuksen jälkeen.

Komponentit

Varastointiolosuhteet

Tuotteita tulee säilyttää -25 ~ -15 ℃ 2 vuoden ajan.Sulatuksen jälkeen Lysis Buffer voidaan säilyttää 2–8 ℃:ssa lyhytaikaista useaa käyttöä varten ja sekoita hyvin käytön aikana.

Sovellus

Tämä tuote soveltuu hiiren knockout-analyysiin, siirtogeenisten havaitsemiseen, genotyypitykseen ja niin edelleen.

ominaisuudet

1.Yksinkertainen käyttö: ei tarvitse erottaa genomista DNA:ta;

2.Laaja sovellus: sopii erilaisten hiiren kudosten suoraan vahvistamiseen.

Ohjeet

1.Genomisen DNA:n vapautuminen

1) Lysaatin valmistus

Kudoslysaatti valmistetaan lysoitavien hiirinäytteiden lukumäärän mukaan (kudoslysaatti tulee valmistaa paikan päällä annostuksen mukaan ja sekoittaa huolellisesti käyttöä varten), ja yhteen näytteeseen tarvittavien reagenssien osuus on seuraava:

2) Näytteen valmistelu ja lyysi

Suositeltu kudosten käyttö

Ota sopiva määrä hiiren kudosnäytteitä puhtaisiin sentrifugiputkiin, lisää 200 µl tuoretta kudoslysaattia jokaiseen sentrifugiputkeen, sekoita ja ravista, inkuboi sitten 55 ℃:ssa 30 minuuttia ja kuumenna sitten 98 ℃:ssa 3 minuuttia.

3) Sentrifugointi

Ravista lysaattia hyvin ja sentrifugoi nopeudella 12 000 rpm 5 minuuttia.Supernatanttia voidaan käyttää templaattina PCR-monistuksessa.Jos mallia tarvitaan säilytykseen, siirrä supernatantti toiseen steriiliin sentrifugiputkeen ja säilytä -20 ℃:ssa 2 viikkoa.

2.PCR-monistus

Poista 2×Mouse Tissue Direct PCR Mix -20 ℃:sta ja sulata jäillä, sekoita ylösalaisin ja valmistele PCR-reaktiojärjestelmä seuraavan taulukon mukaisesti (käytetään jäällä):

Huomautus:

a) Lisättävä määrä ei saa ylittää 1/10 järjestelmästä, ja jos sitä lisätään liikaa, PCR-monistaminen voi estyä.

Suositellut PCR-olosuhteet

Huomautus:

a) Hehkutuslämpötila: Viitaten alukkeen Tm-arvoon, on suositeltavaa asettaa hehkutuslämpötila alukkeen pienempään Tm-arvoon +3~5℃.

Yleisiä ongelmia ja ratkaisuja

1.Ei kohdistettuja nauhoja

1) Liiallinen hajoamistuote.Valitse sopivin määrä mallia, yleensä enintään 1/10 järjestelmästä;

2) Liian suuri otoskoko.Laimenna lysaatti 10 kertaa ja sitten monista tai pienennä näytekokoa ja uudelleenlyysi;

3) Kudosnäytteet eivät ole tuoreita.On suositeltavaa käyttää tuoreita kudosnäytteitä;

4) Pohjamaalin huono laatu.Käytä genomista DNA:ta monistamiseen alukkeen laadun tarkistamiseksi ja alukkeen suunnittelun optimoimiseksi.

2.Epäspesifinen vahvistus

1) Hehkutuslämpötila on liian alhainen ja jaksonumero on liian korkea.Nosta hehkutuslämpötilaa ja vähennä jaksojen määrää;

2) Mallin pitoisuus on liian korkea.Vähennä templaatin määrää tai laimenna mallinetta 10 kertaa monistamisen jälkeen;

3) Huono alukkeen spesifisyys.Optimoi pohjamaalin suunnittelu.

Huomautuksia

1.Näytteiden välisen ristikontaminaation välttämiseksi on valmisteltava useita näytteenottovälineitä, ja työkalujen pinta voidaan puhdistaa 2-prosenttisella natriumhypokloriittiliuoksella tai nukleiinihappopuhdistusaineella jokaisen näytteenoton jälkeen, jos sitä tarvitaan toistuvasti.

2.On suositeltavaa käyttää tuoreita hiiren kudoksia, eikä näytemäärä saa olla liian suuri, jotta se ei vaikuta monistustuloksiin.

3.Hajotuspuskurin tulee välttää toistuvaa jäätymistä ja sulattamista, ja se voidaan säilyttää 2–8 ℃:n lämpötilassa lyhytaikaista useaa käyttöä varten.Jos sitä säilytetään alhaisessa lämpötilassa, saattaa esiintyä saostumista, ja se on liuotettava täysin ennen käyttöä.

4.PCR-seoksen tulee välttää toistuvaa jäätymistä ja sulattamista, ja se voidaan säilyttää 4 ℃:ssa lyhytaikaista toistuvaa käyttöä varten.

5.Tämä tuote on tarkoitettu vain tieteelliseen kokeelliseen tutkimukseen, eikä sitä tule käyttää kliiniseen diagnoosiin tai hoitoon.