Lämpötilaherkkä UNG
Lämpötilaherkkä UNG (TS-UNG) on saatu rekombinanttiekspressiolla E. colissa.Entsyymi katalysoi vapaan urasiilin vapautumista urasiilia sisältävästä yksi- ja kaksijuosteisesta DNA:sta ja on inaktiivinen RNA:ta vastaan.Verrattuna tavanomaiseen E. coli -geenistä peräisin olevaan UNG-entsyymiin, TS-UNG-entsyymillä on korkeampi aktiivisuus matalissa lämpötiloissa (20 ℃ ~ 37 ℃) ja se on lämpötilaherkkä ja helposti inaktivoituva (50 ℃), mikä estää dUTP:tä sisältävän monistumisen hajoamisen. tuotteet huoneenlämpötilassa jäännösaktiivisuuden perusteella, joka voi jäädä tavanomaisen UNG-entsyymin inaktivoinnin jälkeen.Siksi TS-UNG-entsyymi ei sovellu vain PCR-kontaminaation ehkäisyreaktioon, vaan sopii myös hyvin RT-PCR-amplifikaatioohjelmaan ja sitä voidaan käyttää RT-PCR-kontaminaation estoreaktiossa.
Suositeltu sovellus
Kontaminaation ehkäisy, vahvistus
Säilytysolosuhteet
-20°C pitkäaikaista varastointia varten, sekoita hyvin ennen käyttöä, vältä toistuvaa jäätymistä ja sulattamista.
Tallennuspuskuri
20 mM Tris-HCl (pH 7,5), 100 mM NaCl, 0,1 mM EDTA, 1 mM DTT, stabilointiaine, 50 % glyseroli.
Yksikön määritelmä
Entsyymimäärä, joka tarvitaan hajottamaan 1 ug yksijuosteista DNA:ta, joka sisältää dU-emäksiä 1 tunnissa 37 °C:ssa, on 1 aktiivisuusyksikkö (U).
Laadunvalvonta
1.SDS-PAGE elektroforeettinen puhtaus yli 98 %
2.Hajoamisaktiivisuus, eräkohtainen ohjaus, stabiilisuus
3.Ei eksogeenistä nukleaasiaktiivisuutta, ei eksogeenistä endonukleaasi- tai eksonukleaasikontaminaatiota.
Ohjeet
| Komponentit | Tilavuus (μL) | Lopullinen keskittyminen |
| 10 × PCR-puskuri (dNTP-vapaa, Mg²+vapaa) | 5 | 1× |
| dUTP:t (dCTP, dGTP, dATP) | - | 200 µM |
| dUTP (korvaa dTTP) | - | 200-600 μM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 μl | 1-4 mM |
| 5 U/μL Taq | 0,25 | 1,25 U |
| 1 U/μLTS-UNG | 0,5 (0,1-0,5) | 0,5 U (0,1-0,5 U) |
| 25 × Primer Mixa | 2 | 1× |
| Sapluuna | - | ＜1μg/reaktio |
| ddH2O | 50:een | - |
Huomautus: a: Jos käytetään qPCR/qRT-PCR:ssä, fluoresoiva koetin tulee lisätä reaktiojärjestelmään.Yleensä 0,2 μM:n lopullinen alukepitoisuus voi antaa hyviä tuloksia;kun reaktion suorituskyky on huono, alukkeen konsentraatiota voidaan säätää välillä 0,2-1 µM.Yleensä koettimen pitoisuus optimoidaan välillä 0,1-0,3 μM.Konsentraatiogradienttikokeita voidaan suorittaa parhaan alukkeen ja koettimen yhdistelmän löytämiseksi.
Huomautuksia
1.TS-UNG-entsyymin optimaalinen reaktiolämpötila on suhteellisen alhainen ja se voidaan optimoida välillä 20℃ ~ 37℃, entsyymin annostus ja reaktioaika voidaan optimoida välillä 0,1-0,5 U, 5~ 10 min;ja entsyymi voidaan inaktivoida käänteistranskriptioprosessissa.
2.Se soveltuu PCR:ään ja RT-PCR:ään estämään kontaminaation.
3.Vältä toistuvaa jäätymistä ja sulattamista, äläkä altista suurille lämpötilanvaihteluille.
4.Eri monistettavilla geeneillä on erilainen dUTP:n hyötysuhde ja herkkyys UNG-entsyymille, joten jos UNG-järjestelmän käyttö johtaa havaitsemisherkkyyden heikkenemiseen, reaktiojärjestelmää tulee säätää ja optimoida, jos tarvitset teknistä tukea, ota yhteyttä yrityksemme.
