Näytteen vapautusreagenssi
Näytteen vapautumisreagenssi on tarkoitettu molekyyli-POCT-diagnostiikkaan.Kahdessa järjestelmässä, joissa on suora amplifikaatio LAMP ja suora amplifikaatio PCR, ei ole tarvetta nukleiinihappouutolle.Näytteen raakalysaatti voidaan monistaa suoraan, kohdegeeni voidaan havaita tarkasti, näytteen havaitsemisaikaa voidaan edelleen lyhentää, mikä vastaa täydellisesti molekyyli-POCT:n käyttövaatimuksia.Se soveltuu nenäpyyhkeisiin, kurkkupuikkoihin ja muihin näytetyyppeihin.Käsiteltyjä näytteitä voidaan käyttää suoraan reaaliaikaiseen fluoresenssikvantitatiiviseen PCR- tai LAMP-detektioon, ja samat tulokset kuin tavanomaisilla uuttomenetelmillä voidaan saavuttaa ilman monimutkaisia nukleiinihappouuttotoimenpiteitä.
Varastointiolosuhteet
Kuljetus ja säilytys huoneenlämmössä.
Laadunvalvonta
Funktionaalinen havaitseminen – kvantitatiivinen qPCR: 800 μl:n näytteen vapautumisreagenssijärjestelmää vahvistettiin
1000 kopiolla Novel Pseudovirus, yksi nenäpuikkonäyte, jolloin tuloksena on samanlaiset monistuskäyrät jaΔCt-arvot ± 0,5 Ct:n sisällä.
Kokeellinen menettelyres
1. Ota 800 μl näytteenvapautusreagenssia ja levitä lyysiliuos 1,5 ml:n näyteputkeen
2. Ota nenäpuikko tai kurkkupuikko vanupuikolla;Nenäpuikkonäytteenottomenettely: ota steriili vanupuikko ja laita se sieraimiin, etene hitaasti noin 1,5 cm:n syvyyteen, käännä varovasti 4 kertaa nenän limakalvoa vasten yli 15 sekuntia , toista sama toimenpide toiselle nenäontelolle samalla vanupuikolla.Näytteenotto kurkusta: ota steriili vanupuikko ja pyyhi varovasti nopeasti nielun risat ja nielun takaseinä 3 kertaa.
3.Aseta vanupuikko välittömästi näytteenottoputkeen.Vanupuikkopäätä on pyöritettävä ja sitä on sekoitettava säilytysliuoksessa vähintään 30 sekuntia sen varmistamiseksi, että näyte eluoituu kokonaan näyteputkessa.
4. Inkubointi huoneenlämpötilassa (20 - 25 ℃) 1 minuutin ajan, lyysipuskurin valmistus on valmis.
5. Sekä 25 μl:n järjestelmä RT-PCR ja RT-LAMP olivat yhteensopivia 10 μl:n templaatin lisäyksen kanssa detektiokokeita varten.
Huomautuksia
1. Yhtä vanupuikkoa vastaavan näytelysaatin vähimmäismäärä voidaan säätää 400 μl:aan, jota voidaan säätää testaustarpeiden mukaan.
2. Kun näyte on käsitelty näytteenirrotusreagenssilla, on suositeltavaa suorittaa seuraava testivaihe mahdollisimman pian, odotusaika on mielellään alle 1 tunti.
3. Näytelysaatin pH on hapan ja tunnistusjärjestelmässä on oltava tietty puskuri.Se sopii useimpiin PCR-, RT-PCR- ja LAMP-fluoresenssin havaitsemiseen pH-puskurilla, mutta ei sovellu kolorimetriseen LAMP-detektioon ilman puskuria.
