Robustart Taq DNA -polymeraasi
Robustart Taq DNA Polymerase on kuumakäynnistys DNA-polymeraasi.Tämä tuote ei voi ainoastaan paremmin estää epäspesifistä reaktiota, jonka aiheuttaa alukkeiden epäspesifinen pariutuminen tai alukkeiden aggregaatio PCR-järjestelmän valmistelu- ja monistusprosessissa.Siksi sillä on erinomainen spesifisyys ja se on tehokkaampi matalapitoisten templaattien monistamiseen, ja se soveltuu multipleksoituun PCR-amplifikaatioreaktioon.Lisäksi tällä tuotteella on erittäin hyvä soveltuvuus, ja stabiileja monistustuloksia voidaan saada erilaisissa PCR-reaktioissa.
Komponentit
1.5 U/μL Robustart Taq DNA-polymeraasia
2.10 × PCR-puskuri II (Mg²+-vapaa) (valinnainen)
3.25 mM MgCl2(valinnainen)
* 10 × PCR-puskuri II (Mg²+-vapaa) ei sisällä dNTP:tä ja Mg²+:a, lisää dNTP:t ja MgCl2kun valmistellaan reaktiojärjestelmää.
Suositellut sovellukset
1.Nopea vahvistus.
2.Monipuolinen vahvistus.
3.Veren, vanupuikkojen ja muiden näytteiden suora monistus.
4.Hengityselinten sairauksien havaitseminen.
Säilytysolosuhteet
-20°C pitkäaikaista varastointia varten, sekoita hyvin ennen käyttöä, vältä toistuvaa jäätymistä ja sulattamista.
*Jos sataa jäähdytyksen jälkeen, se on normaalia;on suositeltavaa tasapainottaa huoneenlämpötilaan ennen sekoittamista ja käyttöä.
Yksikön määritelmä
Yksi aktiivinen yksikkö (U) määritellään entsyymimääräksi, joka sisällyttää 10 nmol deoksiribonukleotidia happoon liukenemattomaan materiaaliin 74 °C:ssa 30 minuutin ajan käyttämällä aktivoitua lohen siittiöiden DNA:ta templaattina/alukkeena.
Laadunvalvonta
1.SDS-PAGE-elektroforeettinen puhtaus yli 98 %.
2.Vahvistusherkkyys, erä-eräohjaus, vakaus.
3.Ei eksogeenistä nukleaasiaktiivisuutta, ei eksogeenistä endonukleaasi- tai eksonukleaasikontaminaatiota
Ohjeet
Reaktion asetukset
| Komponentit | Äänenvoimakkuus (μL) | Lopullinen keskittyminen |
| 10 × PCR-puskuri II (Mg²+ vapaa)a | 5 | 1× |
| dNTP:t (10 mM kukin dNTP) | 1 | 200 µM |
| 25 mM MgCl2 | 2-8 | 1-4 mM |
| Robustart Taq DNA -polymeraasi (5U/μl) | 0,25-0,5 | 1,25-2,5 U |
| 25 × Primer-seosb | 2 | 1× |
| Sapluuna | - | ＜ 1 μg/reaktio |
| ddH2O | 50:een | - |
Huomautuksia:
1) a.Puskuri ei sisällä dNTP:tä ja Mg²+:a, lisää dNTP:t ja MgCl2kun valmistellaan reaktiojärjestelmää.
2) b.Jos käytetään qPCR/qRT-PCR:ssä, reaktiojärjestelmään tulee lisätä fluoresoivia koettimia.Yleensä 0,2 μM:n lopullinen alukepitoisuus antaa hyviä tuloksia;jos reaktion suorituskyky on huono, alukepitoisuutta voidaan säätää alueella 0,2-1 µM.Koettimen pitoisuus optimoidaan yleensä välillä 0,1-0,3 μM.Konsentraatiogradienttikokeita voidaan suorittaa parhaan alukkeen ja koettimen yhdistelmän löytämiseksi.
Lämpöpyöräilyprotokolla
| Tavallinen PCRkäsitellä asiaa | |||
| Vaihe | Lämpötila | Aika | Pyörät |
| Esidenaturointi | 95℃ | 1-5 min | 1 |
| Denaturaatio | 95℃ | 10-20 sek | 40-50 |
| Hehkutus / pidennys | 56-64℃ | 20-60 sek | |
| Nopea PCRkäsitellä asiaa | |||
| Vaihe | Lämpötila | Aika | Pyörät |
| Esidenaturointi | 95℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturaatio | 95℃ | 1-5 sek | 40-45 |
| Hehkutus / pidennys | 56-64℃ | 5-20 sek | |
Huomautuksia
1.Nopean DNA-polymeraasin monistusnopeuden ei tulisi olla pienempi kuin 1 kb/10 s.Eri PCR-instrumenttien lämpötilan nousu- ja laskunopeus, lämpötilan säätötapa ja lämmönjohtavuuden tehokkuus vaihtelevat suuresti, joten on suositeltavaa optimoida optimaaliset reaktioolosuhteet kullekin nopealle PCR-instrumentille.
2.Järjestelmä on erittäin mukautuva, korkeampi spesifisyys ja herkkyys.
3.Soveltuu käytettäväksi erittäin herkkinä PCR-tunnistusreagensseina, ja sitä voidaan käyttää moninkertaisissa PCR-amplifikaatioreaktioissa.
4.5'→3'-polymeraasiaktiivisuus, 5'→3'-eksonukleaasiaktiivisuus;ei 3'→5'-eksonukleaasiaktiivisuutta;ei oikolukutoimintoa.
5.Soveltuu PCR:n ja RT-PCR:n kvalitatiiviseen ja kvantitatiiviseen testaukseen.
6.PCR-tuotteen 3'-pää on A, joka voidaan kloonata suoraan T-vektoriin.
7.Kolmivaiheista menetelmää suositellaan alukkeille, joiden pariutumislämpötila on alhainen, tai yli 200 emäsparin pituisten fragmenttien monistamiseen.
