Rnase A
Ribonukleaasi A (RNaseA) on yksijuosteinen polypeptidi, joka sisältää 4 disulfidisidosta ja jonka molekyylipaino on noin 13,7 kDa.RNaasi A on endoribonukleaasi, joka spesifisesti hajottaa yksijuosteisen RNA:n C- ja U-tähteistä.Tarkemmin sanottuna pilkkominen tunnistaa fosfodiesterisidoksen, jonka muodostavat nukleotidin 5'-riboosi ja viereisen pyrimidiininukleotidin 3'-riboosin fosfaattiryhmä, joten 2,3'-sykliset fosfaatit hydrolysoituvat vastaaviksi fosfaatiksi. 'nukleosidifosfaatit (esim. pG-pG-pC-pA-pG pilkkoutuu RNaasi A:lla pG-pG-pCp:n ja A-PG:n muodostamiseksi).RNaasi A on aktiivisin yksijuosteisen RNA:n pilkkomisessa.Suositeltu käyttöpitoisuus on 1-100 μG/ml, ja se on yhteensopiva erilaisten reaktiojärjestelmien kanssa.Alhaista suolapitoisuutta (0-100 mM NaCl) voidaan käyttää yksijuosteisen RNA:n, kaksijuosteisen RNA:n ja RNA-DNA-hybridisaatiolla muodostuneiden RNA-ketjujen leikkaamiseen.Kuitenkin korkealla suolapitoisuudella (≥ 0,3 M) RNaasi A pilkkoo spesifisesti vain yksijuosteisen RNA:n.
RNaasi A:ta käytetään yleisimmin RNA:n poistamiseen plasmidi-DNA:n tai genomisen DNA:n valmistuksen aikana. Se, onko DNaasi aktiivinen valmistusprosessin aikana, voi helposti vaikuttaa reaktioon.Perinteistä menetelmää keittämällä vesihauteessa voidaan käyttää DNaasitoiminnan inaktivoimiseen.Tämä tuote ei sisällä DNaasia eikä proteaasia, eikä se vaadi lämpökäsittelyä ennen käyttöä.Lisäksi tätä tuotetta voidaan käyttää myös molekyylibiologisissa kokeissa, kuten RNaasi-suojausanalyysissä ja RNA-sekvenssianalyysissä.
Varastointiolosuhteet
Tuote säilyy -25～-15 ℃, voimassa 2 vuotta.
Ohjeet
Tämä on yksi yleisistä menetelmistä RNaasi A:n varastointiliuoksen valmistamiseksi.Sen voi myös valmistaamuita menetelmiä laboratorio- tai viitekirjallisuuden perinteisten menetelmien mukaisesti (esimliukenee suoraan 10 mM Tris-HCl-liuokseen, pH 7,5 tai Tris-NaCl-liuokseen)
1. Käytä 10 mM natriumasetaattia (pH 5,2) valmistamaan 10 mg/ml RNaasi A -säilytysliuosta
2. Kuumennus 100 ℃ 15 min
3. Jäähdytä huoneenlämpötilaan, lisää 1/10 tilavuus 1 M Tris-HCl:a (pH 7,4), säädä sen pH arvoon 7,4 (vartenLisää esimerkiksi 500 ml 10 g/ml RNaasi-säilytysliuosta 1 M Tris-HCL, PH7,4)
4. Alapakattu -20 ℃ pakastesäilytystä varten, joka voi olla vakaa jopa 2 vuotta.
[Huomautuksia]: Kun RNaasiA-liuosta keitetään neutraaleissa olosuhteissa, muodostuu RNaasi-saostumista;Keitä sitä alhaisemmassa pH:ssa, ja jos tulee saostumista, se voidaan havaita, mikä voi johtua proteiiniepäpuhtauksista.Jos sedimenttiä löytyy keittämisen jälkeen, epäpuhtaudet voidaan poistaa nopealla sentrifugoinnilla (13 000 rpm) ja pakata sen jälkeen pakastevarastointia varten.
Tuotetiedot
| Synonyymit | ribonukleaasi I;haiman ribonukleaasi;Ribonukleaasi 3'-pyrimidnooligonukleotidohydrolaasi;Rnase A;Endoribonulcease I |
| CAS-nro | 9001-99-4 |
| Ulkomuoto | Valkoinen lyofilisoitu jauhe |
| Molekyylipaino | ~ 13,7 kDa (aminohapposekvenssi) |
| PH arvo | 7,6 (toiminta-alue 6-10) |
| Sopiva lämpötila | 60 ℃ (aktiivisuusalue 15-70 ℃) |
| Aktivoiva aine | Na2+.K+ |
| Inhibiittori | Rnaasin estäjä |
| Inaktivointimenetelmä | Ei voida inaktivoida kuumentamalla, on suositeltavaa käyttää sentrifugikolonnia |
| Alkuperä | Nauta |
| Liukoisuus | Liukenee veteen (10mg/ml) |
| Tappio kuivalla | ≤5,0 % |
| Entsyymitoiminta | ≥60 Kunitz-yksikköä/mg |
| Isoelektrinen piste | 9.6 |
Huomautuksia
Turvallisuutesi ja terveytesi vuoksi käytä laboratoriotakkia ja kertakäyttökäsineitä käytön aikana.
