One Step Fast RT-qPCR Probe Premix-UNG
Cat nro: HCR5143A
One Step RT-qPCR Probe Kit (FOR FAST) on koettimeen perustuva RT-qPCR-pikatunnistussarja, joka soveltuu single-plex- tai multiplex- kvantitatiiviseen PCR:ään käyttämällä RNA:ta templaattina (kuten RNA-virusta).Tämä tuote käyttää uuden sukupolven vasta-ainemodifioitua Taq DNA -polymeraasia ja yksivaiheista käänteistä transkriptaasia, jossa on optimoitu puskuri nopeaa amplifikaatiota varten, jolla on nopeampi monistusnopeus, suurempi monistusteho ja spesifisyys.Se tukee tasapainoista vahvistusta sekä singleplexissä että multipleksissä matalan ja korkean pitoisuuden näytteissä lyhyessä ajassa.
Komponentit
1. 5×RT-qPCR-puskuri (U+)
2. Entsyymisekoitus (U+)
Huomautuksia:
a.5×RT-qPCR-puskuri (U+) sisältää dNTP:n ja Mg:n2+;
b.Entsyymisekoitus (U+) sisältää käänteiskopioijaentsyymin, Hot Start Taq DNA -polymeraasin, RNaasi-inhibiittorin ja UDG:n;
c.Käytä RNase-Free-kärkiä, EP-putkia jne.
Sekoita 5×RT-qPCR-puskuri (U+) huolellisesti ennen käyttöä.Jos sulatuksen jälkeen saostuu, odota, että puskuri palaa huoneenlämpöiseksi, sekoita ja liukenee ja käytä sitten normaalisti.
Varastointiolosuhteet
Tuote toimitetaan kuivajään kanssa ja sitä voidaan säilyttää -25 ~ -15 ℃ 1 vuoden ajan.
Ohjeet
1. Reaktio Järjestelmä
| Komponentit | Tilavuus (20 μl reaktio) |
| 2 × RT-qPCR-puskuri | 4 μl |
| Entsyymisekoitus (U+) | 0,8 μl |
| Primer Forward | 0,1-1,0 μM |
| Primer Reverse | 0,1-1,0 μM |
| TaqMan-koetin | 0,05-0,25 μM |
| Sapluuna | X μL |
| RNaasi-vapaa vesi | 25 μl asti |
Huomautuksia: Reaktiotilavuus on 10-50 μL.
2. Pyöräilyprotokolla (Standardi)
| Kierrä askel | Temp. | Aika | Pyörät |
| Käänteinen transkriptio | 55 ℃ | 10 min | 1 |
| Alkudenaturaatio | 95 ℃ | 30 sek | 1 |
| Denaturaatio | 95 ℃ | 10 sek | 45 |
| Hehkutus/pidennys | 60 ℃ | 30 sek |
| Pyöräilyprotokolla (Nopeasti) Kierrä askel |
Temp. |
Aika |
Pyörät |
| Käänteinen transkriptio | 55 ℃ | 5 min | 1 |
| Alkudenaturaatio | 95 ℃ | 5 s | 1 |
| Denaturaatio | 95 ℃ | 3 s | 43 |
| Hehkutus/pidennys | 60 ℃ | 10 s |
Huomautuksia:
a.Käänteisen transkription lämpötila on välillä 50 ℃ - 60 ℃, lämpötilan nostaminen auttaa vahvistamaan monimutkaisia rakenteita ja korkean CG-pitoisuuden malleja;
b.Optimaalinen pariutuslämpötila on säädettävä alukkeen Tm-arvon perusteella ja valittava lyhin aika fluoresenssisignaalin keräämiseen Real Time PCR -laitteen perusteella.
Huomautuksia
Käytä tarvittavia henkilönsuojaimia, kuten laboratoriotakkia ja käsineitä terveytesi ja turvallisuutesi varmistamiseksi!
