Rnaasin estäjä (glyseroliton)
Hiiren RNaasi-inhibiittori on rekombinantti hiiren RNaasi-inhibiittori, joka on ekspressoitu ja puhdistettu E. colista.Se sitoutuu RNaasi A:seen, B:hen tai C:hen suhteessa 1:1 ei-kovalenttisella sidoksella, mikä estää kolmen entsyymin aktiivisuutta ja suojaa RNA:ta hajoamiselta.Se ei kuitenkaan ole tehokas Aspergilluksen RNaasi 1:tä, RNaasi T1:tä, S1-nukleaasia, RNaasi H:ta tai RNaasia vastaan.Hiiren RNaasi-inhibiittori testattiin RT-PCR:llä, RT-qPCR:llä ja IVT-mRNA:lla, ja se oli yhteensopiva useiden kaupallisten käänteistranskriptaasien, DNA-polymeraasien ja RNA-polymeraasien kanssa.
Verrattuna ihmisen RNaasi-inhibiittoreihin, hiiren RNaasi-inhibiittori ei sisällä kahta kysteiiniä, jotka ovat erittäin herkkiä hapettumiselle, joka aiheuttaa inhibiittorin inaktivoitumisen.Tämä tekee siitä vakaan pienillä DTT-pitoisuuksilla (alle 1 mM).Tämä ominaisuus tekee siitä sopivan käytettäväksi reaktioissa, joissa suuret DTT-pitoisuudet ovat haitallisia reaktiolle (esim. reaaliaikainen RT-PCR).
Asovellus
Tätä tuotetta voidaan käyttää laajalti kaikissa kokeissa, joissa RNaasi-interferenssi on mahdollista RNA:n hajoamisen välttämiseksi, kuten:
1. Ensimmäisen juosteen cDNA-synteesi, RT-PCR, RT-qPCR jne.;
2.Suojaa RNA:ta hajoamiselta in vitro -transkriptiossa/translaatiossa (esim. viruksen replikaatio in vitro);
3. RNaasi-aktiivisuuden esto RNA:n eristämisen ja puhdistuksen aikana.
Varastointiolosuhteet
Säilytä -25 ～-15 ℃;
Jäädytys-sulatusjaksot ≤ 5 kertaa;
Voimassa 1 vuoden.
Yksikön määritelmä
Yksi yksikkö määritellään RNaasi-inhibiittorin määräksi, joka tarvitaan estämään 5 ng:n RNaasi A:n aktiivisuus 50 %:lla.
Molekyylipaino
RNaasi-inhibiittori (glyseroliton) on 50 kDa:n proteiini.
Laadunvalvonta
Eksonukleaasi Toiminta:
Inkuboitiin 40 U entsyymiä 1 μg:n λ-Hind III -digesti-DNA:n kanssa 16 tunnin ajan 37 °C:ssa, mikä ei johtanut havaittavaan DNA:n hajoamiseen geelielektroforeesilla määritettynä.
Endonukleaasiaktiivisuus:
Inkuboitiin 40 U entsyymiä 1 μg λ DNA:n kanssa 16 tunnin ajan 37 °C:ssa, mikä ei johtanut havaittavaan DNA:n hajoamiseen geelielektroforeesilla määritettynä.
Nikkiminen Toiminta:
40 U entsyymiä inkuboitiin 1 µg pBR322:n kanssa 16 tunnin ajan 37 °C:ssa, mikä ei johtanut havaittavaan DNA:n hajoamiseen geelielektroforeesilla määritettynä.
RNaasi Toiminta:
Inkuboitiin 40 U entsyymiä 1,6 µg MS2 RNA:n kanssa 4 tunnin ajan 37 ℃:ssa, mikä ei johtanut havaittavaan RNA:n hajoamiseen geelielektroforeesilla määritettynä.
E.colin DNA:
TaqMan qPCR havaitsee 40 U entsyymiä.E. colin DNA on ≤ 0,1 pg/40 U.
Nhuoms
1. Älä ravista tai sekoita voimakkaasti estääksesi entsyymien inaktivoitumisen.
2.RNaasi-inhibiittori on aktiivinen lämpötiloissa 25 ℃ - 55 ℃ ja inaktivoituu ≥ 65 ℃:ssa.
3. RNaasi H:n, RNaasi 1:n ja RNaasi T1:n aktiivisuutta ei estetä.
4. RNaasi-aktiivisuuden estämisen pH-alue on laaja (aktiivinen pH-arvossa 5-9), ja sen aktiivisuus on maksimi pH-arvossa 7-8.
