DNAaasi I
DNaasi I (deoksiribonukleaasi I) on endodeoksiribonukleaasi, joka pystyy pilkkomaan yksi- tai kaksijuosteista DNA:ta.Se tunnistaa ja katkaisee fosfodiesterisidoksia tuottaakseen monodeoksinukleotideja tai yksi- tai kaksijuosteisia oligodeoksinukleotidejä, joissa on fosfaattiryhmiä 5'-päässä ja hydroksyyliä 3'-päässä.DNaasi I:n aktiivisuus riippuu Ca2+:sta ja sen voivat aktivoida kaksiarvoiset metalli-ionit, kuten Mn2+ ja Zn2+.5 mM Ca2+ suojaa entsyymiä hydrolyysiltä.Mg2+:n läsnä ollessa entsyymi voisi satunnaisesti tunnistaa ja katkaista minkä tahansa kohdan mistä tahansa DNA-juosteesta.Mn2+:n läsnä ollessa DNA:n kaksoisjuosteet voidaan tunnistaa ja katkaista samanaikaisesti lähes samasta kohdasta, jolloin muodostuu tasapäisiä DNA-fragmentteja tai tahmeapäisiä DNA-fragmentteja, joissa on 1-2 nukleotidia.
Tuotteen ominaisuus
Naudan haiman DNaasi I ilmennettiin hiivaekspressiojärjestelmässä ja puhdistettiin.
Ckomponentteja
| Komponentti | Äänenvoimakkuus | |||
| 0.1KU | 1KU | 5KU | 50 KU | |
| DNaasi I, RNaasi-vapaa | 20 μl | 200μl | 1 ml | 10 ml |
| 10×DNaasi I -puskuri | 1 ml | 1 ml | 5 × 1 ml | 5 × 10 ml |
Kuljetus ja varastointi
1. Varastointistabiilisuus: – 15 ℃ ~ -25 ℃ varastointia varten;
2. Kuljetusvakaus: Kuljetus jääpakkausten alla;
3. Toimitetaan: 10 mM Tris-HCl, 2 mM CaCl2, 50 % glyserolia, pH 7,6 25 ℃:ssa.
Yksikön määritelmä
Yksi yksikkö määritellään entsyymimääräksi, joka hajottaa täydellisesti 1 ug pBR322 DNA:ta 10 minuutissa 37 °C:ssa.
Laadunvalvonta
RNaasi:5 U DNaasi I:tä 1,6 μg:lla MS2 RNA:ta 4 tunnin ajan 37 ℃:ssa ei tuota hajoamista agaroosigeelielektroforeesilla määritettynä.
Bakteeri Endotoksiini:LAL-testi, Kiinan farmakopean IV 2020 painoksen mukaan, geelirajatestimenetelmä, yleissääntö (1143).Bakteerien endotoksiinipitoisuuden tulee olla ≤10 EU/mg.
Käyttöohjeet
1. Valmista reaktioliuos RNaasi-vapaaseen putkeen alla lueteltujen suhteiden mukaisesti:
| Komponentti | Äänenvoimakkuus |
| RNA | X μg |
| 10 × DNAase I -puskuri | 1 μl |
| DNaasi I, RNaasivapaa (5U/μL) | 1 U per μg RNA:ta |
| ddH2O | Jopa 10 μl |
2,37 ℃ 15 minuuttia;
3. Lisää lopetuspuskuri reaktion pysäyttämiseksi ja lämmitä 65 ℃:ssa 10 minuuttia DNaasi I:n inaktivoimiseksi. Näytettä voidaan käyttää suoraan seuraavassa transkriptiokokeessa.
Huomautuksia
1. Käytä 1 U DNaasi I:tä μg RNA:ta kohti tai 1 U DNaasi I:tä alle 1 μg RNA:ta kohden.
2. EDTA:ta tulisi lisätä lopulliseen pitoisuuteen 5 mM RNA:n suojaamiseksi hajoamiselta entsyymin inaktivaation aikana.
