Bst 2.0 DNA-polymeraasi (glyseroliton, suuri tiheys)
Bst-DNA-polymeraasi V2 on peräisin Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I:stä, jolla on 5'→3'-DNA-polymeraasiaktiivisuutta ja vahva ketjunkorvausaktiivisuus, mutta ei 5'→3'-eksonukleaasiaktiivisuutta.Bst DNA Polymerase V2 soveltuu ihanteellisesti juosteen syrjäyttämiseen, isotermiseen amplifikaatioon LAMP (silmukkavälitteiseen isotermiseen amplifikaatioon) ja nopeaan sekvensointiin.Tämä Bst DNA-polymeraasi V2 pystyy estämään DNA-polymeraasin aktiivisuutta huoneenlämpötilassa, joten sitä voidaan käyttää ja reaktiosysteemi voidaan formuloida huoneenlämpötilassa, mikä estää epäspesifisen monistumisen ja parantaa reaktion tehokkuutta, ja tämä versio voi lyofilisoida.Lisäksi se pystyy vapauttamaan aktiivisuutensa korotetuissa lämpötiloissa, mikä eliminoi erillisen aktivointivaiheen tarpeen.
Komponentit
| Komponentti | HC5007A-01 | HC5007A-02 | HC5007A-03 |
| Bst DNA-polymeraasi V2 (glyseroliton) (32U/μl) | 0,05 ml | 0,25 ml | 2,5 ml |
| 10 × HC Bst V2 -puskuri | 1,5 ml | 2 x 1,5 ml | 3 × 10 ml |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 ml | 2 x 1,5 ml | 2 × 10 ml |
Sovellukset
1.LAMP-isoterminen vahvistus
2.DNA-juosteen yhden syrjäytysreaktio
3.Korkea GC-geenisekvensointi
4.DNA-sekvensointi nanogrammatasolla.
Säilytysolosuhteet
Kuljetus alle 0°C ja säilytettävä -25°C ~ -15°C.
Yksikön määritelmä
Yksi yksikkö määritellään entsyymimääräksi, joka liittää 25 nmol dNTP:tä happoon liukenemattomaan materiaaliin 30 minuutissa 65 °C:ssa.
LAMPPU Reaktio
| Komponentit | 25 μLJärjestelmä |
| 10 × HC Bst V2 -puskuri | 2,5 μl |
| MgSO4 (100mM) | 1,5 μl |
| dNTP:t (kukin 10mM) | 3,5 μl |
| SYTO™ 16 Green (25×)a | 1,0 μl |
| Primer sekoitusb | 6 μl |
| Bst DNA Polymerase V2 (glyseroliton) (32 U/uL) | 0,25 µl |
| Sapluuna | × μL |
| ddH2O | Jopa 25 μl |
Huomautuksia:
1) a.SYTOTM 16 Green (25×): Kokeellisten tarpeiden mukaan muita väriaineita voidaan käyttää korvikkeena;
2) b.Alukeseos: saatu sekoittamalla 20 µM FIP:tä, 20 µM BIP:tä, 2,5 µM F3:a, 2,5 µM B3:a, 5 µM LF:ä, 5 µM LB:tä ja muita tilavuuksia.
Reaktio ja kunto
1 × HC Bst V2 -puskuri, inkubointilämpötila on 60 °C - 65 °C.
Lämmön poisto
80 °C, 20 minuuttia.
